薛枫 杨向军
苏州大学附属第一医院 

    目的 通过建立兔心肌急性缺血再灌注模型来研究缺血后适应对心脏的保护作用，同时对其机制进行探讨， 从而为临床上运用缺血后适应提供理论基础。 
    方法 60只新西兰大白兔随机分为对照组、缺血后适应组、缺血后适应+PD98059组、缺血后适应+LY294002组和假手术组，每组12 只。对照组结扎左前降支30 分钟后立即恢复心肌灌注，持续达180 分钟。缺血后适应组结扎左前降支30 分钟后，实施间断性心肌灌注，方案为：再灌注30 秒，再次结扎该血管30 秒（重复4 次），然后恢复心肌灌注180 分钟。缺血后适应+PD98059组仍结扎左前降支30 分钟，但在静脉推注PD98059 10 分钟后实施间断性心肌灌注，方案同缺血再灌注组。缺血后适应+LY294002组亦结扎左前降支30 分钟，在静脉推注LY294002 10 分钟后后实施间断性心肌灌注，方案同缺血再灌注组。结扎血管采用“二线二结”法。假手术组仅将线从左前降支周围心肌中穿过，但并不结扎。实验中持续心电监护并于术前、结扎后10 分钟和再灌注后120 分钟描记II 导心电图。实施缺血再灌注各组分别于结扎前和再灌注后60 分钟从股静脉取血1ml，假手术组于穿线前和穿线后60 分钟同样途径取静脉血1ml，运用ELISA 法测定血清肌钙蛋白浓度。再灌注结束后取心肌行相关检查。其中每组中6 只兔运用2，3，5—氯化三苯基四氮唑染色测定各组心肌坏死面积，另外六只兔取心肌运用光学显微镜和透射式电子显微镜行组织形态学检查，并提取蛋白，通过Western Blot 检测Bad、Akt、P-Akt、ERK1/2和P-ERK1/2 蛋白表达。 
    结果 1. 各组兔术前性别、体重和心率无明显差异（P＞0.05）。心肌缺血后心率有增快趋势，但与术前比亦无明显差异（P＞0.05）。2. 血管结扎后四组心电图均可见II 导联ST段弓背上抬，再灌注后120 分钟四组心电图均可见ST 段回落。对照组、缺血后适应+PD98059组再灌注后分别有8 只和6 只兔ST段下降50%，而缺血后适应组和缺血后适应+ LY-294002组均有10 只兔ST 段下降50%。但四组间差异不显著(P＞0.05)。3. 缺血后适应组和缺血后适应+LY294002组心律失常评分明显低于对照组(P<0.05)，而缺血后适应+PD98059组与对照组无明显差异(P>0.05).4. 血清肌钙蛋白浓度结扎前各组间无明显差异（P＞0.05）， 但再灌注60 分钟后对照组、缺血后适应组、缺血后适应+PD98059组和缺血后适应+LY294002组该浓度(ng/ml)分别为：6.63±2.32、3.04±1.10、7.12±2.30 和3.52±1.67。缺血后适应组和缺血后适应+LY294002组该值明显低于对照组 (P<0.05)，而缺血后适应+PD98059组该值与对照组无明显差异(P>0.05)。5. 光学显微镜与透射式电子显微镜检测均表明缺血后适应组和缺血后适应+ LY294002 组兔心肌细胞损伤较对照组和缺血后适应+PD98059 组轻。6. 对照组、缺血后适应组、缺血后适应+PD98059组和缺血后适应+LY294002组心肌梗死面积分别为：23.63±12.08%、10.96±2.07%、25.16±9.3%和12.65±2.0%。缺血后适应组和缺血后适应+ LY294002 组兔心肌梗死面积明显减少，与对照组比较有显著性差异﹙P<0.05)，而缺血后适应+PD98059组该值与对照组无明显差异(P>0.05)。7.与对照组相比缺血后适应组和缺血后适应+ LY294002组兔心肌Bad 蛋白表达明显下降，P-ERK1/2蛋白表达明显增加（P<0.05），而缺血后适应+PD98059组与对照组无明显差异(P>0.05)。四组间兔心肌P-Akt蛋白表达无明显差异（P>0.05）。 
    结论 1. “二线二结”法能够既方便又成功地建立兔在体心脏缺血再灌注模型。2. 缺血后适应能明显减少缺血再灌注损伤。3. ERK1/2 细胞信号途径参与介导了缺血后适应对兔缺血再灌注心肌的保护作用，PI3K-Akt信号途径可能未参与此保护作用。